用于诱导重组蛋白表达的诱导剂主要是IPTG和乳糖。

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）是 β–半乳糖苷酶的活性诱导物质，常用于蓝白斑筛选

及 IPTG 诱导的细菌内的蛋白表达等。

当 pUC 系列的载体DNA（或其他带有 lacZ 基因载体 DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、

或用M13 噬菌 体的载体 DNA 进行 转染时，如果在平板培养基中加入 X–Gal 和 IPTG，

由于 β–半乳糖苷酶的 α–互补性，可以根据是否呈现 白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。

此外，它还可以作 为具有 lac 或 tac 等启动子的表达载体的表达诱导物使用。

在原核蛋白表達体系中，如E.coli（大肠埃希菌）系统，外源基因通常需要诱导剂的诱导才能进行表达

(工具/原料)

LB（Luria—Bertani）培养基：酵母膏(Yeast extract)5g 蛋白胨(Peptone) 10g NaCl 10g 琼脂(Agar)

1-2% 蒸馏水(Distilled water) 1000ml pH 7.0

IPTG 贮备液：2 g IPTG溶于10 mL 蒸馏水中，0 . 22 μm 滤膜过滤除菌，分装成1 mL /份，-20 ℃ 保存

凝胶电泳加样缓冲液50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 ) 50 mmol / L DTT 2 % SDS （电泳级） 0.1 ％ 溴酚蓝 10 ％ 甘油

细菌蓝白斑筛选原理：

 
IPTG为安慰型诱导物，可诱导β-半乳糖苷酶的产生，X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物，在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质：

5-溴-4-靛蓝，有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。

但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因，则不能产生β-半乳糖苷酶，因此不能分解X-gal产生蓝色底物，所在的菌落呈现白色（相对蓝色）

这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。

IPTG诱导蛋白表达的原理:

E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基轉移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。

I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激活蛋白（CAP）结合位点。

由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达。

在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。

此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。

在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。

乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。

异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。