DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种常用的核酸染料，可以和双链DNA富含AT序列的小沟结合，产生比自身强20多倍的蓝色荧光。

和EB(ethidium bromide)相比，DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也可对RNA进行染色，染色机理是其可以选择性嵌入“AU序列”并发出荧光。相比DAPI-dsDNA

(Ex/Em=358nm/461 nm)，

DAPI-RNA具有较长的最大发射波长(500 nm)，其荧光亮度仅有DAPI-dsDNA的20%。

尽管DAPI不能通过活细胞膜，但可以通过提高浓度使之进入活细胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及

染色体DNA。

DAPI典型的蓝色荧光特性使其非常普遍的搭配其他绿色、黄色或红色荧光染料用于细胞生物学多色荧光标记技术，因此也常作为核酸和染色体的复染剂用于细胞凋亡检测、RNA原位杂     交、直接或间接免疫检测等领域，其染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

使用方法:

1. 配制工作液：

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10 μg/mL）。

2. 固定的细胞或组织染色：

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI 染色。

a) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。

b) 对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c) 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：

a) 细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

b) 在37℃培养细胞 10～20 分钟。

c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

DAPI，荧光颜色：蓝色；染细胞类型：活细胞和固定细胞；应用：

 （1）DAPI是一种常用的可以穿透细胞膜蓝色荧光DNA染料，可对DNA 染色的细胞核染色试剂，其与DNA结合后可以产生比DAPI 自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。

（2）DAPI常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI,荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。

（3）DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为-种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。

 使用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。

 但是如果我们只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色即可以。但是如果我们一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！

 这个时候使用Abbkine的细胞状态检测系列产品，例如，TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒（细胞凋亡晚期），Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒和线粒体膜电位分析试剂盒（JC-1）

（细胞凋亡早期）以及Caspase系列活性分析试剂盒(比色法)（细胞凋亡中期）。